一、實驗目的1.了解植物組織中葉綠素的分布和性質(zhì)。2、掌握測定葉綠素含量的原理和方法。二、實驗原理葉綠素廣泛存在于水果、蔬菜等綠色植物組織中，與植物細胞中的蛋白質(zhì)結(jié)合形成葉綠體。當植物細胞死亡時，葉綠素就會釋放出來。游離葉綠素非常不穩(wěn)定，對光和熱敏感。在酸性條件下，葉綠素形成綠褐色脫鎂葉綠素，在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠素。酸式鹽以及植醇和甲醇。高等植物中的葉綠素有兩種：葉綠素a和b，均易溶于乙醇、丙酮和氯仿。葉綠素含量的測定方法很多，主要有： 1、原子吸收光譜法：通過測定鎂的含量，進而間接計算出葉綠素的含量。 2、分光光度法：用分光光度計測量葉綠素提取物在最大吸收波長處的吸光度值，然后可以利用朗伯-比爾定律計算提取物中各色素的含量。葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有最大吸收，兩條吸收曲線在652nm處相交。因此，分別測定了提取物在645nm、663nm和652nm波長處的吸光度值，可根據(jù)經(jīng)驗公式分別計算出葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的含量。三、儀器、原材料和試劑儀器儀器分光光度計、電子頂裝天平（靈敏度0.01g）、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦拭紙、滴管。原料 新鮮（或干燥）植物葉試劑 1. 96% 乙醇（或 80% 丙酮） 2. 石英砂 3. 碳酸鈣粉。四、操作步驟取新鮮的植物葉子（或其他綠色組織）或干燥的材料，擦去組織表面的污垢，去除中脈，切塊。稱取2g新鮮切碎的樣品，放入研缽中，加入少量石英砂、碳酸鈣粉和3mL 95%乙醇，研磨成均質(zhì)漿液，加入10mL乙醇，繼續(xù)研磨至組織變白.靜置 3 到 5 分鐘。取1張濾紙放入漏斗中，用乙醇潤濕，沿玻璃棒倒出提取液。倒入漏斗中，濾液流入100mL棕色容量瓶中；用少量乙醇沖洗研缽、杵和殘渣數(shù)次，最后與殘渣一起倒入漏斗中。用滴管吸去乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直到濾紙和殘渣沒有綠色為止。最后，用乙醇定容至 100 mL，搖勻。取葉綠體色素提取物，在665nm、645nm和652nm波長處測定吸光度，以95%乙醇作為空白對照。5、計算根據(jù)實驗原理中提供的經(jīng)驗公式，分別計算植物材料中葉綠素a、b和總?cè)~綠素的含量。
提取葉綠素提取的準備工作在室溫為 25°C 的半暗室中進行。提取步驟如下：(1)取1000克新鮮綠葉，放入韋伯斯特攪拌機中粉碎。(2)將1000克壓碎的綠葉提取到加入少量碳酸鈣的丙酮(溫度20℃)中，直至過濾和洗滌的葉碎片無色。
原則葉綠素廣泛存在于水果、蔬菜等綠色植物組織中，在植物細胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合形成葉綠體。植物細胞死亡時，葉綠素是游離的，游離的葉綠素很不穩(wěn)定，對光熱敏感；在酸性條件下，葉綠素產(chǎn)生綠褐色的脫鎂葉綠素，脫鎂葉綠素在稀酸堿液中水解成亮綠色的葉綠素以及葉綠醇和甲醇。高等植物中的葉綠素有兩種：葉綠素a和b，均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
葉綠素是植物光合作用的重要參與者。葉綠素的變化也反映了植物養(yǎng)分的豐富程度，或者是否受到外界的干擾。事實上，這在農(nóng)業(yè)中得到了很好的應用。研究人員經(jīng)常對作物進行營養(yǎng)診斷，試圖通過研究作物葉綠素打開提高作物質(zhì)量和產(chǎn)量的大門。
葉綠素是植物光合作用中重要的光合色素，可分為a、b、c、d四類。葉綠素不溶于水，但溶于有機溶劑，如乙醇、丙酮、氯仿等；葉綠素不是很穩(wěn)定，會被光、酸、堿、氧氣、氧化劑等分解；葉綠素a的分子式C55H72O5N4Mg，在酸性條件下，葉綠素a分子容易失去卟啉環(huán)中的鎂而成為脫鎂葉綠素；葉綠素a存在于所有浮游植物中，約占有機干重的1%～2%。
葉綠素是植物光合作用中重要的光合色素。葉綠素有四種常見類型 a、b、c 和 d。其中，葉綠素a是唯一能將光合作用的光能傳遞給化學反應體系的色素。 c、d等吸收的光能全部通過葉綠素a傳遞到化學反應體系。通過測量葉綠素a，可以掌握水體的初級生產(chǎn)力，了解河流、湖泊和海洋中浮游植物的存在量。實驗表明，當葉綠素a的質(zhì)量濃度上升到10 mg/m3以上并有快速上升的趨勢時，可以預測水體將發(fā)生富營養(yǎng)化。
葉綠素是植物光合作用中重要的光合色素，可分為a、b、c、d四類。葉綠素不溶于水，但溶于有機溶劑，如乙醇、丙酮、乙醚、氯仿等；葉綠素不是很穩(wěn)定，會被光、酸、堿、氧氣、氧化劑等分解；葉綠素a分子式為C55H72O5N4Mg，在酸性條件下，葉綠素a分子容易失去卟啉環(huán)中的鎂而成為脫鎂葉綠素。
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