BOD五日生化測定儀通過監(jiān)測水樣中溶解氧的變化來反映有機物污染程度，正常情況下測量結(jié)果應(yīng)為正值（表示微生物消耗氧氣）。若出現(xiàn)負值，說明測定過程存在異常，需從樣品、儀器、操作等維度系統(tǒng)排查。

一、樣品中存在還原性物質(zhì)

當(dāng)水樣含有亞硝酸鹽、硫化物等還原性物質(zhì)時，這些物質(zhì)會與溶解氧發(fā)生化學(xué)反應(yīng)（如亞硝酸鹽被氧化為硝酸鹽），導(dǎo)致培養(yǎng)后溶解氧反而升高，形成負值。例如印染廢水或化工廢水中的亞硫酸鹽，在 5 天培養(yǎng)期內(nèi)可消耗水中的氧化劑，使溶解氧濃度上升 0.5-2mg/L。排查方法：取 100mL 水樣，加入 1mL 淀粉溶液和 0.1mol/L 碘溶液，若溶液不變藍，說明存在強還原性物質(zhì)，需預(yù)處理（如加入過氧化氫氧化）后再測定。

二、稀釋水溶解氧過飽和

稀釋水需經(jīng)曝氣處理至溶解氧接近飽和（25℃時約 8.2mg/L），若曝氣過度或水溫驟降，會使溶解氧過飽和（超過 9mg/L）。培養(yǎng)過程中，過飽和的溶解氧會自然釋放，若釋放量超過微生物消耗量，就會出現(xiàn)負值。例如冬季室溫突然下降 5℃，稀釋水溶解氧可能從 8mg/L 升至 9.5mg/L，即使微生物消耗 1mg/L，最終仍會顯示 - 0.5mg/L。解決辦法：稀釋水曝氣后需靜置 24 小時，確保溶解氧穩(wěn)定在 8-8.5mg/L 范圍內(nèi)。

三、儀器密封性失效

測定儀的密封蓋若未擰緊或密封圈老化，會導(dǎo)致外界空氣滲入培養(yǎng)瓶，空氣中的氧氣溶解進入水樣，使溶解氧升高。特別是采用壓力傳感器原理的儀器，密封不良會導(dǎo)致壓力變化異常，直接顯示負值。檢查方式：將培養(yǎng)瓶浸入水中觀察是否有氣泡溢出，或更換新的硅膠密封圈（建議每 3 個月更換一次），確保密封壓力達到儀器要求（通常為 0.02-0.05MPa）。

四、接種液活性不足或失效

接種液（如污水處理廠活性污泥）若存放過久（超過 48 小時）或受有毒物質(zhì)污染，微生物活性會大幅下降，無法有效消耗氧氣。若水樣本身含氧量較高，而微生物消耗的氧氣量小于水樣中溶解氧的自然波動，就會出現(xiàn)負值。判斷方法：用葡萄糖 - 谷氨酸標準溶液（BOD 值約 210mg/L）驗證，若測定值低于 180mg/L，說明接種液失效，需重新制備。

五、溫度控制異常干擾微生物代謝

儀器培養(yǎng)箱的溫度需嚴格控制在 20±1℃，若溫度低于 15℃，微生物活性受抑制，耗氧速率下降；若溫度驟升（如超過 25℃），會導(dǎo)致水樣中溶解氧溶解度降低，釋放的氧氣可能超過消耗值。例如培養(yǎng)箱溫控故障導(dǎo)致溫度從 20℃升至 28℃，水樣溶解氧會從 8mg/L 降至 6.5mg/L，若微生物僅消耗 0.3mg/L，最終結(jié)果為 - 1.2mg/L。排查需校準溫控系統(tǒng)，確保溫度波動≤±0.5℃。

六、操作過程中的污染影響

若測定前用自來水沖洗培養(yǎng)瓶，殘留的氯會殺死微生物，同時氯在水中會緩慢釋放氧氣（如 0.1mg/L 余氯可使溶解氧上升 0.3mg/L）。此外，采樣時混入表面活性劑（如洗滌劑殘留），會形成泡沫吸附空氣，導(dǎo)致溶解氧異常升高。預(yù)防措施：培養(yǎng)瓶需用蒸餾水沖洗 3 次以上，采樣工具避免接觸含氯或表面活性物質(zhì)的環(huán)境。

當(dāng) BOD 測定出現(xiàn)負值時，可按 “樣品預(yù)處理→儀器檢查→操作復(fù)核” 的順序排查，優(yōu)先驗證稀釋水質(zhì)量和儀器密封性。對于工業(yè)廢水等復(fù)雜水樣，建議同時做空白對照實驗（僅用稀釋水培養(yǎng)），若空白出現(xiàn)負值，說明問題出在稀釋水或儀器；若空白正常，則需聚焦水樣本身的特性。通過系統(tǒng)排查，可有效解決 90% 以上的負值異常，確保測定結(jié)果的可靠性。